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客服中心反饋紹興某生物技術(shù)有限公司想了解自己生產(chǎn)的保健食品液體飲料，需要檢測(cè)肽含量。

客戶背景

客戶想把他們自主研發(fā)生產(chǎn)的脾氨肽濃縮液(生產(chǎn)日期2023年11月20日)和肝蛋白水解物濃縮液(生產(chǎn)日期2023年11月22日)根據(jù)《GB/T22729 海洋魚低聚肽粉》進(jìn)行低聚肽含量(以干基計(jì))/%檢測(cè)，看是否符滿足研發(fā)目的。

樣品名稱

脾氨肽濃縮液(生產(chǎn)日期2023年11月20日)

肝蛋白水解物濃縮液(生產(chǎn)日期2023年11月22日)

客戶需求

檢測(cè)樣品低聚肽含量(以干基計(jì))/%

解決方案

根據(jù)GB/T 22729 海洋魚低聚肽粉 低聚肽含量

方法和原理：

低分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)水解物(包括低聚肽及游離氨基酸)可溶于三氯乙酸溶液;高分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)在三氯乙酸溶液中易沉淀。樣品經(jīng)三氯乙酸溶液溶解后,離心分離出沉淀蛋白質(zhì),收集離心清液。按照GB/T 5009.5規(guī)定的方法測(cè)定離心清液的酸溶蛋白質(zhì)水解物含量,清液的酸溶蛋白質(zhì)水解物含量減去游離氨基酸含量得到低聚肽的含量。

酸溶蛋白質(zhì)水解物含量的測(cè)定：稱取2g(精確至0.001 g)樣品,加入10 mL 15%三氯乙酸溶液,混合均勻,靜置10 min。將樣品溶液在4 000 r/min下離心10 min后,取全部離心清液,按GB/T 5009.5規(guī)定的方法測(cè)定清液的蛋白質(zhì)水解物含量,計(jì)算出樣品中酸溶蛋白質(zhì)水解物含量。蛋白質(zhì)換算系數(shù)為6.25.檢驗(yàn)結(jié)果根據(jù)樣品的干燥失重,折算為干基。

游離氨基酸含量的測(cè)定(高效液相色譜儀測(cè)定法)：用三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)后，以鄰苯二甲醛(OPA)和氯甲酸芬甲酯(FMOC一CI)分別作為一級(jí)氨基酸和二級(jí)氨基酸的衍生反應(yīng)試劑,采用柱前自動(dòng)衍生化反相高效液相色譜法測(cè)定海洋魚低聚肽粉中的游離氨基酸總量。

稱取樣品0.5 g,精確至0.000 1 g,于25 mL容量瓶中,加5%三氯乙酸10 mL沉淀2 h,定容搖勻，過濾,于10 000 r/min離心15 min,取上清液上機(jī),采用外標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定。色譜條件:分析柱:Hypersil AA-ODS,5 um,200 mm×2.1 mm(內(nèi)徑)。流動(dòng)相:A液:含0.018%三乙胺(TEA)的20 mmol/L乙酸鈉緩沖液,用稀乙酸調(diào)至pH7.2.加0.3%四氫味喃(THF);B液:20%的 100 mmol/L乙酸鈉緩沖液,用稀乙酸調(diào)至pH7.2.加40%乙腈和40%甲醇。梯度洗脫程序:0 min時(shí)A液為100%,在17 min內(nèi)B液由o%至60%;18 min時(shí)B液為100%,并保持至24 min;25 min時(shí)B液回到0%。流速:18.1 min前為0.45 mL/min; 18.5 min升至0.8 mL/min,并保持至23.9 min;24 min降回至0.45 mL/min。紫外檢測(cè):測(cè)定一級(jí)氨基酸用338 nm,二級(jí)氨基酸用262 nm(15 min后)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：經(jīng)檢測(cè)，客戶送的脾氨肽濃縮液和肝蛋白水解物濃縮液的低聚肽含量分別為28.1%和20.9%。

客戶反饋

客戶對(duì)于測(cè)試結(jié)果和我們技術(shù)人員進(jìn)行探討、我們相互研究并且給客戶提供寶貴的意見。并且后續(xù)還有好幾批樣品要送來進(jìn)行檢測(cè)。